GLP条件下做好动物解剖和组织固定的心得体会

2017-03-30 作者:卢婷婷

毒性病理学是评价中药天然药、化学药和生物技术药物毒性和危险因素的学科,是毒理学的重要组成部分。在病理学评价中减少误差,充分揭示和反映毒性所致的病理学改变,要求毒性病理学评价使用规范的实验方法和评定标准。其中很重要的一步是实验动物的解剖和组织固定。

一个标准的动物解剖流程包括:(1)查看最近一次的临床观察记录,确认解剖中的注意事项;(2)确认动物ID(耳标、纹身)和动物标签,确认剖检记录表;(3)检查体表、眼、耳、口腔、鼻孔、肛门和生殖器周围有无异常;(4)检查皮下组织包括淋巴结有无异常;(5)根据方案和SOP摘取相应的脏器并进行大体观察。

解剖过程中的注意事项:(1)所有方案要求检查的脏器都需摘取并固定,尤其注意小的脏器需要放在包埋盒中固定,以防丢失;(2)防止解剖过程中的人为损伤,以免因为人为损伤会导致病理诊断困难甚至无法诊断。常见的人为损伤包括:(1)气体麻醉如CO2麻醉导致肺脏和胸腺急性出血;(2)解剖过程中器械使用不当及过度牵拉、挤压导致的机械损伤(如图所示,手触摸过的肠粘膜就可能出现组织病理学的异常改变);(3)解剖时间过长,导致组织脏器自溶(特别是消化酶含量较多的脏器)或胃肠粘膜层脱落等(4)用不合适的固定液灌注脏器等。


为防止细菌腐蚀和组织自溶,保存细胞固有物质,凝固或沉淀细胞内或组织液、糖原等,使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样,并使组织硬化,便于后续组织取材、包埋及切片等工作有序进行,就都必须对组织进行及时和有效的固定。影响组织固定的因素主要有以下几点:(1)组织的大小。如福尔马林固定液24小时渗透厚度小于5 mm,因此解剖过程中,大的脏器要尽可能地切开后固定;(2)固定液体积。固定液体积至少为组织体积的10倍;(3)固定的时间。根据固定液的性质和组织的用途,选择合适的固定时间,特别是做免疫用途的组织,根据抗原保存的条件控制好固定时间,一般为6 ~ 48 h;(4)固定液的选择。例如眼球固定液的选择,如供试品对视网膜有影响,可以选择Davidson’s固定液,如供试品对晶状体有影响可以选择戊二醛进行固定。(5)pH值。虽然固定液的pH值对光镜检查的切片没有大的影响,但如10 % NBF(中性福尔马林)的pH值低于6,就会产生福尔马林色素,对于免疫用组织,固定液的pH值需控制在7.2 ~ 7.4之间



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